Maxifreeze pour centrifuger la semence porcine

Au cours des ces dernières années la conservation du sperme de verrat à base température a fait l’objet de nombreuses recherches.

Tous les protocoles de congélation du sperme de verrat utilisent la centrifugation de la semence, mais à des moments différents et à des températures différentes. Le rôle de la centrifugation est double : éliminer presque totalement le plasma séminal et permettre d’ajuster la concentration de la semence et d’ajouter le dilueur de congélation contenant le cryoprotecteur.

Pour rappel, la méthode classique fait appel à la centrifugation de la semence diluée à 800 g pendant 10-15 minutes à 15 °C. Le surnageant est enlevé et le culot de sperme dilué à l’aide d’un dilueur de congélation. La vitesse et le temps de centrifugation constituent une agression, et ont une influence significative sur la survie des spermatozoïdes après décongélation. Après centrifugation, les pertes de  spermatozoïdes s’estiment par le rapport entre le nombre de spermatozoïdes se trouvant dans le culot, dans le surnageant ou dans les paillettes, et le nombre de spermatozoïdes initialement dilués. Avec la méthode classique, les pertes de spermatozoïdes dans le surnageant varient selon les verrats et ejaculats entre 25 et 40 %.

Un essai de fécondation in-vitro est en cours auprès de la chaire de reproduction de l’Université de Murcie. Cette méthode nous encourage tout particulièrement dans la poursuite de nos investigations.

Maxifreeze  /  Technique of centrifugation of the boar semen

During these last years the boar sperm conservation below zero has been studied. All the boar semen freezing protocols use centrifugation but at different times and temperatures.

The role of centrifugation is double :  to remove the seminal plasma and to adjust the sperm concentration before to add the cooling and freezing extender.

The conventional method, centrifuge the diluted fresh semen at 800 g 15 °C during 10-15 minutes.  After being spun, the centrifuge tube is removed carefully so as not to disturb the pellet which will have formed in the bottom of the cup.Suction off the supernatant fluid gently until the sperm pellet starts to move and the pellet sperm is diluted with cooling and freezing extender.

The centrifugation techniques employed have necessarily been a compromise between the need to recover as many sperm as possible after centrifugation and the damage caused by pelleting the sperm. The speed and times of centrifugation constitute an aggression and have a significant influence on the survival of the sperm cells after thawing.  After centrifugation, losses of sperm cells are estimated by the relationship between the number of sperm cells being in the pellet, the supernatant or the straws and the number of sperm cells initially diluted.  With the conventional method, the losses of sperm cells in the supernatant vary according to the boar and ejaculates between 25-40 %.  The new centrifugation procedure suggested method "Maxifreeze" or cushioned technique uses high speed and time centrifugation (1000-1100 g at 15 °C during 20-25 minutes) to ensure maximum sperm recovery while minimising physical damage to sperm. Maxifreeze is a dense cushioning solution into which the sperm cannot pass.

The loss of sperm cells in the supernatant with this new method is limited to 5-15 % according to boars and ejaculates and the viability of the sperm cells after thawing is higher.

A test of in-vitro fertilization is already done at Murcia University (Spain). This method particularly encourages us in the continuation of our investigations.